摘要

我們利用表面敏感技術(shù)振動(dòng)SUM頻率產(chǎn)生光譜結(jié)合表面壓力測(cè)量，對(duì)水中自組裝的偶氮苯基光開關(guān)脂質(zhì)單層進(jìn)行了分子深入研究。光脂質(zhì)可經(jīng)歷波長(zhǎng)依賴的、光觸發(fā)的順/反和順/反異構(gòu)化，允許可逆控制表面壓力和單層中脂質(zhì)的分子順序。如果光開關(guān)脂質(zhì)與傳統(tǒng)磷脂（如1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿（DPPC））嵌在一層中，我們表明，在偶氮苯基脂質(zhì)的兩種狀態(tài)之間切換會(huì)影響DPPC的表面壓力和分子順序。值得注意的是，具有較高表面壓力的狀態(tài)（順式狀態(tài)）以較低的分子有序度為特征。這個(gè)違反直覺的結(jié)果可以通過注意到順式狀態(tài)的偶氮苯部分具有更高的偶極矩來理解，因此有利于與水的相互作用。該系統(tǒng)的表面自由能通過與界面上的脂質(zhì)頭基的靜電相互作用而降低（表面壓力增加），導(dǎo)致脂質(zhì)尾與順式偶氮苯形成環(huán)。這種光開關(guān)脂質(zhì)尾部的紊亂擾亂了DPPC的順序。

導(dǎo)言

偶氮苯基表面活性劑分子的自組裝單分子膜是一種獨(dú)特的光開關(guān)界面，在納米技術(shù)中具有潛在的傳感器應(yīng)用前景。1-3波長(zhǎng)約400 nm的光在順式和反式狀態(tài)之間切換表面活性劑可導(dǎo)致表面壓力、表面電位、囊泡穩(wěn)定性和臨界膠束濃度的顯著差異。2,4-7還表明，將偶氮苯基表面活性劑嵌入人工膜中，可以對(duì)機(jī)械敏感膜通道蛋白的活性進(jìn)行外部光學(xué)控制。8因此，了解開關(guān)過程背后的分子細(xì)節(jié)對(duì)于開發(fā)人工門控機(jī)制也很重要，這可能最終用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)應(yīng)用。9盡管開關(guān)過程很重要，但在分子水平上缺乏對(duì)開關(guān)過程的詳細(xì)理解。5.

圖1：。順式和反式構(gòu)型的光開關(guān)脂質(zhì)DT Azo-5P和d75 DPPC的分子結(jié)構(gòu)。右上角的插圖顯示了CHCl3中DT Azo-5P的紫外/可見光譜(～在370 nm（順式）和450 nm（反式）下輻照約10 s后，使用7μM，1 cm反應(yīng)杯）。

在此，我們研究了光開關(guān)脂質(zhì)DT Azo-5P（圖1）的單分子膜，該單分子膜是純的，并與脂質(zhì)1,2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿（DPPC）混合。如圖1中的紫外/可見光譜所示，光活性脂質(zhì)可分別在370 nm和450 nm的光照下從其反式狀態(tài)切換到順式狀態(tài)并返回。我們將表面壓力測(cè)量與無標(biāo)簽、寬帶振動(dòng)和頻產(chǎn)生（VSFG）光譜相結(jié)合。這些技術(shù)使我們能夠研究空氣-水界面上的脂質(zhì)分子單層?？梢垣@得有關(guān)脂類與水分子相互作用的信息以及脂類的分子結(jié)構(gòu)。在非線性光學(xué)技術(shù)VSFG中，紅外（IR）光束和可見光（VIS）光束在界面處組合，產(chǎn)生具有兩個(gè)入射光束和頻率的信號(hào)。如果紅外與分子振動(dòng)共振，信號(hào)就會(huì)強(qiáng)烈增強(qiáng)。研究表明，這種通過分子振動(dòng)的技術(shù)可以提供有關(guān)脂類分子構(gòu)象和取向的信息。11-18和頻產(chǎn)生在中心對(duì)稱介質(zhì)中是被禁止的，因?yàn)樗且粋€(gè)二階非線性光學(xué)過程。19因此，該技術(shù)對(duì)中心對(duì)稱材料（例如水表面）的最外表面分子層敏感。相反，缺少信號(hào)表明界面上的材料或分子基團(tuán)是中心對(duì)稱的。對(duì)于金表面偶氮苯功能化的自組裝單分子膜，SFG在確定光異構(gòu)化的截面和機(jī)理方面非常有用。得出的結(jié)論是，光異構(gòu)化是由直接電子激發(fā)驅(qū)動(dòng)的，類似于液相中的偶氮苯。3我們將表明，通過切換光脂，可以可逆地控制脂質(zhì)的表面壓力和分子順序。在同時(shí)含有光脂和脂質(zhì)DPPC的混合單分子膜中，我們可以通過光學(xué)切換偶氮苯基脂質(zhì)來控制DPPC的順序。這為體外控制脂質(zhì)-脂質(zhì)相互作用提供了一種新的手段。

實(shí)驗(yàn)

樣品前面已經(jīng)描述了含偶氮苯的二烷基磷酸酯DT Azo-3P、DT Azo-5P和DT Azo-9P的合成。在VSFG實(shí)驗(yàn)中，將20層DT Azo-5P（或-3P和-9P）單分子膜從0.6 mM氯仿溶液中擴(kuò)散到空氣H2O（微孔，18 MΩ/cm-1）界面上，在自制的7×7 cm2槽中進(jìn)行VSFG實(shí)驗(yàn)，并在6×23 cm2的商用金屬朗繆爾槽（Kibron Inc.，芬蘭）中進(jìn)行等溫線測(cè)量。正常DPPC和d75 DPPC（圖1）從Avanti極性脂質(zhì)中獲得，均溶于氯仿中，濃度約為0.7 mM。兩種脂類的混合物是通過在表面攤鋪之前混合每種化合物的溶液制成的。每個(gè)分子的面積由散布在水面上的0.5μL液滴的數(shù)量控制。使用中心波長(zhǎng)為370和450 nm、功率分別為8.3和21 mW的二極管在光開關(guān)脂質(zhì)的兩種構(gòu)象之間進(jìn)行切換，如圖1所示。我們將370 nm和450 nm輻照后的系統(tǒng)分別稱為“順式”和“反式”狀態(tài)，盡管總是存在構(gòu)象的混合物。由于順式和反式之間的吸收差在370nm左右非常大，因此可以獲得相對(duì)純凈的順式狀態(tài)。如果假設(shè)順式狀態(tài)在390 nm處的吸光度為零（圖1），則該波長(zhǎng)處的吸光度較小是由順式狀態(tài)中存在的反式狀態(tài)引起的。由于390 nm處的吸光度是完全熱平衡跨光譜的5%，我們得出結(jié)論，最多有5%的跨分子對(duì)整個(gè)吸收光譜有貢獻(xiàn)。如果順式狀態(tài)在390 nm處有一個(gè)很小的吸收，則存在的反式分子分?jǐn)?shù)甚至低于這5%。然而，450 nm處順式構(gòu)象和反式構(gòu)象之間的吸收對(duì)比度并沒有那么大，導(dǎo)致一些順式分子出現(xiàn)在，我們這里稱之為反式狀態(tài)。反式狀態(tài)將被順式分子“污染”。由于反式狀態(tài)對(duì)熱有利，輻照平衡將更多地轉(zhuǎn)移到反式狀態(tài)，從而降低順式污染。通過將完全熱平衡反式態(tài)的UVvis吸收光譜與450 nm輻照半分鐘后的光譜進(jìn)行比較，可以從觀察中提取順式污染的量，即后一個(gè)光譜可以由完全熱平衡反式光譜的0.75倍和順式光譜的0.25倍構(gòu)成。由此我們得出結(jié)論，反式狀態(tài)中最多存在25%的順式“污染”。如果樣品保持在黑暗中，順式狀態(tài)的UV和SFG光譜在30分鐘內(nèi)不會(huì)發(fā)生變化：顯然，從順式到反式的熱轉(zhuǎn)變很慢。transcis和順-反異構(gòu)化的量子產(chǎn)率都與波長(zhǎng)有關(guān)，通常達(dá)到數(shù)十%。（參見參考文獻(xiàn)21）。

設(shè)置。表面壓力測(cè)量。使用商用張力計(jì)（芬蘭Kibron）以針為探針測(cè)量表面壓力。在壓縮等溫線實(shí)驗(yàn)中，該層以～7?2/分子/分鐘，帶有兩個(gè)移動(dòng)屏障。在等溫線實(shí)驗(yàn)中，用370 nm的光照射樣品約60 s，然后將其攤鋪在表面，制備出分子的順式狀態(tài)。

振動(dòng)和頻發(fā)生光譜學(xué)。使用可見光脈沖（12540 cm-1，～20μJ，帶寬17 cm-1，半最大全寬，fwhm），與寬帶紅外脈沖重疊（中心為2160或2960 cm-1，分別研究C-D和C-H拉伸模式，脈沖能量為～5μJ，半高寬帶寬為150 cm-1）。這些紅外脈沖是由OPG/OPA（TOPAS，光轉(zhuǎn)換）產(chǎn)生的，OPG/OPA由～100 fs放大鈦寶石激光系統(tǒng)（Legend，Coherent，Inc.）。窄帶可見光脈沖提供了實(shí)驗(yàn)的光譜分辨率，而寬帶紅外脈沖允許同時(shí)檢測(cè)多種振動(dòng)模式。10,22為了校正紅外功率的頻率依賴性，VSFG光譜通過z切石英的參考光譜進(jìn)行歸一化?？梢姽夂图t外光束相對(duì)于表面法線的入射角分別為35
和40
。兩條光束都聚焦到大約100μm的束腰。可見光束的注量足夠低，可以避免偶氮苯部分的雙光子異構(gòu)化，這是通過比較輻照前后的光譜來檢查的。VSFG光通過單色儀進(jìn)行光譜分散，并通過電子倍增電荷耦合器件（EMCCD和或技術(shù)）進(jìn)行檢測(cè)。除非另有說明，否則在s極化VSFG、s極化VIS和p極化IR（SSP）條件下，純DT Azo-5P實(shí)驗(yàn)在60 s內(nèi)記錄VSFG光譜，混合物在180 s內(nèi)記錄VSFG光譜。在我們交替使用順式和反式狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)中，二極管從上方照射系統(tǒng)。二極管發(fā)出的光沒有聚焦，幾乎照射了整個(gè)槽，因此，由于脂質(zhì)從照射區(qū)域外擴(kuò)散到激光焦點(diǎn)而導(dǎo)致的信號(hào)失真不是一個(gè)重要因素。壓力計(jì)和激光焦點(diǎn)均位于二極管照射區(qū)域內(nèi)。我們始終照射至少100 s（分別對(duì)應(yīng)于370和450 nm的1.5
1018和4.8
1018光子），以獲得最大轉(zhuǎn)化率，這從動(dòng)力學(xué)研究中可以明顯看出：照射超過100 s不會(huì)再改變壓力和VSFG信號(hào)。